一、多肽合成仪技术原理：固相多肽合成(SPPS)的核心逻辑
多肽合成仪基于Bruce Merrifield于1963年提出的固相多肽合成法(SPPS)，其核心是通过将氨基酸C端固定在树脂载体上，逐次添加N端保护的氨基酸完成肽链延伸。具体步骤如下：
树脂预处理
选择合适的固相载体(如Rink Amide Resin)，用二氯甲烷(DCM)溶胀树脂，去除杂质后抽干备用。
脱保护
使用碱性溶剂(如20%六氢吡啶/DMF溶液)去除前一个氨基酸的Fmoc保护基团，使氨基暴露以参与下一步反应。
偶联反应
将新的氨基酸(N端保护)与活化试剂(如HBTU、DCC)混合，形成活性酯后投入反应器，与脱保护的氨基结合形成肽键。
洗涤与纯化
每步反应后用DMF、甲醇等溶剂洗涤，去除未反应的原料和副产物，减少杂质积累。
裂解与释放
合成完成后，用三氟乙酸(TFA)等裂解液将多肽从树脂上切下，经乙醚沉淀、离心、干燥得到粗肽。
技术优势：
自动化操作：减少人工误差，提高重复性。
高效纯化：固相载体便于分离，避免液相合成中复杂的中间体纯化步骤。
规模化生产：支持毫克级至克级合成，满足药物研发需求。
二、关键组件与功能：精密控制的硬件基础
多肽合成仪的硬件设计直接影响合成效率与产物纯度，核心组件包括：
反应器
材质：玻璃或聚丙烯，耐化学腐蚀。
容量：覆盖30μmol(小规模研究)至3g树脂(工业化生产)。
多通道设计：支持2/4/6通道并行合成，提升高通量能力。
溶剂输送系统
自动输送模块：精确控制DMF、DCM等溶剂的流速(误差<1%)。
惰性气体保护：通过氮气/氩气隔绝氧气，防止氨基酸氧化。
温控模块
精度：±0.5℃，减少消旋化副反应。
范围：室温至60℃，适配不同保护基团的脱除条件。
检测与控制系统
UV监测：实时检测反应液吸光度，判断脱保护/偶联终点。
质谱分析：可选配在线质谱，确认每步产物结构。
三、多肽合成仪操作流程：从试剂准备到产物纯化的全链条
设备校准与准备
检查溶剂储液瓶与气体管道连接，确保无泄漏。
校准温度、压力、取液针等参数，运行自检程序。
试剂与材料准备
称量氨基酸、活化试剂(如HBTU)、溶剂(DMF、DCM)。
将树脂加入反应器，用DCM溶胀后抽干。
合成程序设置
输入多肽序列，设定反应条件(温度、时间、溶剂比例)。
示例：Fmoc脱保护(20%哌啶/DMF，5分钟×2次)；偶联反应(3倍过量氨基酸，1小时)。
自动化合成
启动程序，仪器自动完成脱保护、偶联、洗涤循环。
监测反应进程，如UV吸光度稳定后进入下一步。
产物裂解与纯化
加入裂解液(TFA/水/三异丙基硅烷=95:2.5:2.5)，室温搅拌2小时。
过滤除去树脂，浓缩裂解液后用乙醚沉淀粗肽。
通过高效液相色谱(HPLC)纯化，得到高纯度多肽(>95%)。
